Kilti selil se youn nan zouti ki pi enpòtan yo itilize nan selil ak byoloji molekilè, ki bay yon sistèm modèl ekselan pou etidye fizyoloji nòmal ak byochimi (egzanp, syans metabolik, aje), efè dwòg ak konpoze toksik sou selil yo ansanm ak efè yo. nan mutagenèz selil ak kanserojèn. Li se tou itilize nan tès depistaj dwòg ak devlopman, ak nan pwodiksyon an gwo echèl nan konpoze byolojik (egzanp vaksen, pwoteyin ki ka geri). Yon gwo avantaj nan itilize kilti selilè pou nenpòt nan aplikasyon sa yo se konsistans ak repwodiksyon rezilta yo ka jwenn lè w sèvi ak yon pakèt selil klon.
kilti selil
Kilti selil refere a retire selil nan bèt oswa plant ak kwasans yo nan yon anviwònman favorab atifisyèl. Selil yo ka retire dirèkteman nan tisi a epi yo ka disosye anzimatik oswa mekanikman anvan kilti, oswa yo ka sòti nan liy selil oswa tansyon etabli.
1. Fòmasyon Prensipal
Kilti prensipal refere a etap nan kilti apre selil yo te izole nan tisi ak pwopaje nan kondisyon apwopriye jiskaske yo okipe tout substra ki disponib (sa vle di, rive nan konfluans). Nan etap sa a, selil yo dwe subcultured (sa vle di, pasaj) lè yo transfere yo nan yon nouvo veso ki gen mwayen kwasans fre pou bay plis plas pou kwasans kontinye.
2. Liy selilè
Apre premye subkilti a, kilti prensipal yo rele liy selilè oswa subklon. Liy selilè ki sòti nan kilti prensipal yo gen yon lavi fini (sa vle di, yo fini) epi lè yo pase, selil ki gen pi gwo potansyèl kwasans domine, sa ki lakòz yon degre inifòmite genotip ak fenotip nan sèks popilasyon an.
3. Liy selilè
Yon liy selil vin tounen yon souch selil si yon sou-populasyon nan liy selil la aktivman chwazi nan kilti pa klonaj oswa lòt metòd. Liy selilè souvan jwenn chanjman jenetik adisyonèl apre yo te kòmanse liy paran an.
4. Liy selil limite ak liy selil kontinyèl
Selil nòmal yo anjeneral divize sèlman yon kantite limite nan fwa anvan yo pèdi kapasite yo nan pwopagasyon, yon evènman jenetikman detèmine ki rele senesans; liy selil sa yo rele fini. Sepandan, kèk liy selil vin imòtèl atravè yon pwosesis ki rele transfòmasyon, ki ka rive espontaneman oswa ki ka pwovoke chimikman oswa viralman. Yon liy selil fini vin tounen yon liy selil kontinyèl lè li sibi yon transfòmasyon epi li pran kapasite pou divize endefiniman.
Liy selil kontinyèlman kiltive yo gen tandans fè drift jenetik, liy selil fini yo kondane a laj, tout kilti selil yo sansib a kontaminasyon mikwòb, ak echèk ekipman ka rive nan menm laboratwa ki pi bon yo. Depi liy selil etabli yo se yon resous valab ki gen ranplasman ki koute chè epi ki pran tan, li esansyèl pou kriyoprezève yo pou depo alontèm.
Yon fwa yo jwenn yon ti kantite selil ki rete nan subculture, yo ta dwe jele kòm yon stock grenn epi pwoteje kont itilizasyon jeneral nan laboratwa. Stock k ap travay yo ka prepare ak ranplir soti nan stock grenn nan frizè. Si stock grenn nan apovri, Lè sa a, stock kryopreserve k ap travay la ka itilize kòm yon sous pou prepare stock grenn fre, ki bay yon ogmantasyon minimòm nan kantite soti nan friz inisyal la.
Pi bon fason pou cryopreserve selil kiltive yo se nan nitwojèn likid, nan mwayen konplè, nan prezans kriyoprotektan tankou dimethyl sulfoxide (DMSO) oswa gliserin. Cryoprotectants bese pwen konjelasyon mwayen an epi tou redwi pousantaj refwadisman, anpil diminye risk fòmasyon kristal glas, ki ka domaje selil yo epi mennen nan lanmò selil.
DMSO se li te ye pou fasilite antre nan molekil òganik nan tisi yo. Lè w ap manyen reyaktif ki gen sulfoksid dimethyl, yo ta dwe itilize ekipman ak pratik ki apwopriye pou danje materyèl sa a. Jete reyaktif yo dapre règleman lokal yo.
Fè grandi selil ki soti nan stock selil k ap travay nan frizè
Asire w ke w ranpli liv journal bankè mobil la
Detèmine kantite pasaj, pa egzanp, si selil anvan yo te jele epi yo te dekonjle twa fwa, pwosesis dekonjle a ta katriyèm pasaj la.
Ajoute medya kwasans (medya minimòm, serom ti towo bèf, ak antibyotik) nan flacon T75 ki make ak liy selilè, nimewo pasaj, ak dat.
Mete flakon la orizontal nan yon enkibatè CO a 37 degre ak 5 pousan CO pou omwen 15 min. Sa a pral chofe mwayen an epi pote l nan pH nòmal li (7.0-7.6)
Dekonjle flakon jele ak liy selil yo nan yon beny dlo 37 degre ak ajitasyon dou. Pou diminye risk kontaminasyon, kenbe bag o ak bouchon an pi wo pase nivo dlo a (2-5 minit).
Mete flakon an nan yon kabinè sekirite byolojik (BSL-2). Pou evite kontaminasyon, siye ak 70 pousan etanòl anvan ou louvri flakon an.
Transfere sa ki nan flacon selil jele nan yon flacon T75 ki gen mwayen kwasans. Melanje epi souke flakon la dousman pou distribye selil yo respire sou sifas flakon la.
Enkube flakon la lannwit lan nan yon enkibatè CO2 a 37 degre ak 5 pousan CO2. Pèmèt selil yo tache lannwit lan
chanje mwayen kwasans
Enkube flacon a pou yon lòt 2-4 jou a 37 degre, 5 pousan CO2 epi kontwole jiskaske selil yo grandi.
Yon fwa selil yo rive nan apeprè 90 pousan konfluyans, stock selil la ka elaji lè l sèvi avèk yon flacon T150.