Deteksyon PCR
Reyaksyon chèn polymerase (PCR) sèvi ak yon moso ADN kòm yon modèl, ak patisipasyon ADN polymerase ak substra nukleotid, ADN a anplifye nan yon kantite lajan ase pou analiz estriktirèl ak fonksyonèl. Metòd deteksyon PCR la gen yon enpòtans enpòtan anpil nan dyagnostik rapid nan klinik maladi enfeksyon bakteri.
Prensip PCR itilize pou anplifye yon fragman ADN ki sitiye ant de sekans li te ye, menm jan ak pwosesis replikasyon ADN natirèl la. Yo itilize molekil ADN pou anplifye a kòm yon modèl, epi yo itilize yon pè fragman oligonukleotid ki konplemantè ak 5'fen ak 3'fen modèl la kòm primè. Anba aksyon ADN polymerase la, li swiv modèl la dapre mekanis replikasyon mwatye rezève. Chèn ekstansyon jiskaske fini nouvo sentèz ADN, repete pwosesis sa a, fragman ADN sib la ka anplifye.
(PCR) se yon metòd pou anzimatik sentèz fragman ADN espesifik nan vitro. Li konsiste de plizyè etap nan denaturasyon wo-tanperati, rkwir ba-tanperati, ak ekstansyon tanperati apwopriye. Karakteristik tankou sansiblite segondè, operasyon fasil, ak ekonomize tan. Li ka itilize pa sèlman nan rechèch debaz tankou izolasyon jèn, klonaj ak analiz sekans asid nikleyik, men tou, nan dyagnostik maladi oswa nenpòt kote ki gen ADN ak RNA. Reyaksyon chèn Polymerase (Polymerase Chain Reaction, PCR pou kout) yo konnen tou kòm klonaj molekilè san selil oswa sekans ADN espesifik nan teknoloji anplifikasyon anzimatik ki dirije nan vitro.
Replikasyon semi-rezève ADN se yon fason enpòtan pou evolisyon byolojik ak pasaj. ADN doub-bloke ka denatire ak fonn nan yon sèl strand anba aksyon an nan yon varyete de anzim. Avèk patisipasyon ADN polymerase ak yon pwomotè, ADN doub-chachen an ka repwodui nan menm de molekil yo dapre prensip appariement baz konplemantè. Nan eksperyans, li te jwenn ke ADN ka tou denatire ak fonn nan tanperati ki wo, epi li ka renatured nan fil doub ankò lè tanperati a bese. Se poutèt sa, lè w kontwole denaturasyon ak renaturasyon ADN atravè chanjman tanperati, ak konsepsyon primè kòm pwomotè, ajoute ADN polymerase ak dNTPs ka ranpli replikasyon an vitro nan jèn espesifik.
Pwen ki senp se sèvi ak ekipman espesyal, sèvi ak dNTPS, Mg2+, primè espesifik, ADN polymerase, ak sistèm tanpon, ajoute modèl, ki se echantiyon ADN pou anplifikasyon in vitro, epi fè elektwoforèz. Si li ka anplifye, ak gwosè a nan pwodwi a anplifye Konfòm ak gwoup la sib, sa vle di ke Jadendanfan an ak modèl yo espesifik, ak endèks la deteksyon se pozitif.
Metòd ak etap deteksyon asid nikleyik PCR
Tès asid nikleik mande pou senk etap: echantiyon, retansyon echantiyon, retansyon, ekstraksyon asid nikleyik, ak tès òdinatè.
Deteksyon asid nikleik
Premye etap la se kolekte sekresyon imen ak siye kavite nan nen oswa miray dèyè nan farinks la ak amidal farinks bilateral ak yon tès nan nen oswa yon tès farinks.
Nan dezyèm etap la, anplwaye medikal la kenbe echantiyon an, plonje tèt la tès la nan solisyon an prezèvasyon selil, epi vise bouchon tib la imedyatman apre yo fin kraze ke a.
Nan twazyèm pati a, mete echantiyon an nan yon sache ki byen fèmen, kenbe li epi voye li pou enspeksyon nan tan.
Katriyèm etap la se voye echantiyon an nan laboratwa a pou ekstrè asid nikleyik.
Nan senkyèm etap la, ekstrè a sibi yon reyaksyon fliyoresan anplifikasyon PCR.
Epitou bezwen kèk consommables ak enstriman
Enstriman PCR, tib PCR, pwent pipèt, plak byen fon, rezèvwa, ak reyaktif te ajoute
