Nan epòk apre epidemi an, tèm "tès asid nikleyik la" se abitye pou nou tout, epi li te vin yon pati nan lavi chak jou nou an.
Se konsa, èske w konnen ki jan tès asid nikleyik detekte viris? Ak ki jan tès asid nikleyik fè viris envizib "vizib"?
01 Ki sa ki asid nikleyik
Asid nikleik se tèm jeneral pou ADN ak RNA.
Asid nikleik se yon eleman esansyèl nan tout lavi li te ye sou tè a. ADN nou souvan di se asid deoxyribonukleik. Materyèl jenetik nouvo coronavirus la se RNA - asid ribonukleik.
Tès anplifikasyon asid nikleik
02 Ki sa egzakteman tès asid nikleyik detekte?
Sibstans pou deteksyon asid nikleyik se asid nikleyik viris la.
Nouvo kowonaviris la se yon viris ki gen sèlman RNA, epi sekans RNA espesifik nan viris la se yon makè ki fè distenksyon viris la ak lòt patojèn. Deteksyon asid nikleik se pou chèche konnen si gen asid nikleyik nan viris anvayi etranje nan echantiyon respiratwa pasyan an oswa san pou detèmine si li enfekte pa nouvo coronavirus la. A vas majorite deteksyon aktyèl asid nikleyik nouvo kowonaviris yo sèvi ak metòd fluoresan PCR quantitative pou anplifye sekans sib RNA viral la pa PCR apre transkripsyon ranvèse.
PCR, oswa reyaksyon chèn polymerase, se yon teknik byoloji molekilè yo itilize pou anplifye fragman ADN espesifik; li refere a reyaksyon an ADN polymerase-catalysed nan jèn espesifik oswa reyaksyon an nan rapid anplifikasyon in vitro nan sekans ADN yo rele tou jèn nan anplifikasyon vitro. Teknoloji PCR quantitative fluorescent se ajoute yon sistèm repòtè fluorescent nan sistèm reyaksyon PCR la, epi sèvi ak chanjman nan siyal fluorescent pou kontwole pwosesis PCR la an tan reyèl, pou reyalize deteksyon quantitative modèl inisyal la.
Pou detekte asid nikleyik, premye etap la se kolekte yon echantiyon. Kounye a, metòd echantiyon ki pi konvansyonèl la se: sèvi ak gòj oswa prelèvman nan nen pou siye ak kolekte aparèy respiratwa siperyè (farinks oswa kavite nan nen); echantiyon yo kolekte yo pral entèdi sele, ak Lè sa a, voye nan laboratwa a pou tès gradyèl.
1. Ekstraksyon RNA viral
RNA viris la premye extrait nan echantiyon an. Ajoute reyaktif ekstraksyon asid nikleyik nan echantiyon an pou detwi viris la epi lage asid nikleyik la.
2. "Reverse transcription" viral RNA nan cDNA
Atravè teknoloji transkripsyon ranvèse (RT), RNA viris la "ranvèse" nan yon ADN espesifik ki pi fasil pou detekte, se sa ki, cDNA.
3. Anplifikasyon ak deteksyon cDNA
An reyalite, si li se prelèvman gòj, prelèvman nan nen oswa menm echantiyon san, kontni an viris nan echantiyon an se relativman ba, menm nan pasyan ki enfekte grav (chaj viral la se gwo); paske patikil viris yo twò piti epi volim echantiyon an limite, Kantite viris ki genyen nan echantiyon an toujou twò piti pou deteksyon asid nikleyik.
Se poutèt sa, lè l sèvi avèk teknoloji PCR, enspektè yo anplifye inik "modpas" nouvo coronavirus nan echantiyon an nan pwen kote ekipman an ka detekte li, pou yo jije si li se yon enfeksyon pozitif. Tout pwosesis pou pwan materyèl jenetik viris la se tankou lapèch. Zen an pral idantifye epi pwan li, se konsa ke viris la pa gen okenn kote yo kache.
Senpleman mete, li se anplifye kantite cDNA, se konsa ke cDNA a kontinyèlman repwodui, se konsa ke nimewo a ogmante eksponansyèlman.
Pwosesis PCR estanda a divize an twa etap:
Denaturasyon: Sèvi ak tanperati ki wo pou separe seksyon doub ADN. Lyezon idwojèn ki genyen ant fil doub ADN yo kase nan tanperati ki wo (93 - 98 degre).
Recuit: Apre doub fil ADN yo te separe, tanperati a bese pou pèmèt primè yo mare ak ADN ki pa marye a.
Ekstansyon: ADN polymerase sentèz yon fil konplemantè sou fil ADN ki soti nan primè a lè tanperati a bese. Lè elongasyon konplè, yon sik fini epi kantite fragman ADN double. Repete twa etap sa yo 25-35 fwa, epi kantite fragman ADN yo ap ogmante eksponansyèlman.
PCR doub-chachen modèl
Pandan ke cDNA a ap anplifye, sond fliyoresan nan twous la ap travay ansanm. Li pral lage yon siyal fliyoresan, epi chak fwa cDNA a anplifye, siyal fliyoresan an ap ogmante yon ti kras, ak detektè PCR a ka anrejistre yon valè Ct nan yon ogmantasyon siyal fliyoresan.
Valè Ct a se yon endikatè enpòtan pou jije si asid nikleyik viris la negatif oswa pozitif. Mwens ADN inisyal la, plis sik PCR oblije rive nan yon sèten papòt, ak pi wo valè Ct la. Kontrèman, plis ADN inisyal la, se pi ba valè Ct la. Kantite inisyal ADN reflete kantite RNA viral nan echantiyon an, ki an vire reflete kantite viris nan echantiyon an. Se poutèt sa, si valè Ct la pa detekte oswa pi wo pase yon sèten valè, Lè sa a, pasyan an sispèk yo jije kòm negatif; si li pi ba pase valè sa a, Lè sa a, pasyan an sispèk jije kòm pozitif.
Pandan reyaksyon PCR la, seleksyon PCR consommables se tou youn nan faktè ki pi enpòtan ki afekte rezilta deteksyon asid nikleyik.