Jodi a, ann pale sou yon eleman kle nan eksperyans PCR - consommables. Kòm yon vizitè souvan nan PCR, li nesesè yo konprann karakteristik yo ak tèminoloji ki gen rapò ak PCR consommables.
Gen yon gran varyete PCR consommables sou mache a, ki gen ladan mak, espesifikasyon, koulè, elatriye, ki klere tou. Ann konprann li etap pa etap.
plak pcr
1. Materyèl
Anjeneral, materyèl bwit nan PCR consommables se polypropylène. Li se yon bon chalè ki reziste materyèl inaktif. Ranje tanperati k ap travay la se -30 a 140 degre, ki pèmèt li kenbe tèt ak chanjman enèji tèmik pandan sik tèmik reyaksyon PCR la, epi li jwe yon bon wòl nan sele ak pwoteje sibstans ki sou sistèm reyaksyon PCR la.
Aprann plis sou polypropylène
2. Koulè
Moun ki komen yo se tib blan ak tib PCR transparan. Nan eksperyans PCR tradisyonèl yo, pa gen okenn diferans ant de la. Sepandan, nan menm eksperyans an tan reyèl / qPCR, tib blan yo te relativman pi sansib ak konsistan pou enstriman qPCR ak lekti siyal apik (al gade Figi A ak B anba a). poukisa se konsa?
tib pcr
A: pi ba valè Ct pou tib blan konpare ak tib klè; B: pi bon repetibilite ak tib blan.
Done debaz qPCR se valè Ct, ak siyal fluoresans la se sous done pou kalkile valè Ct, kidonk li trè enpòtan si fluoresans nan tib la ka konplètman transmèt nan detektè a. Mi tib blan an anpeche fliyoresans la pase nan miray tib la ak refraksyon (Figi A anba a), kidonk anpeche fliyoresans la transmèt nan blòk chofaj la (sa vle di, miray twou metal la kote tib la mete) epi yo absòbe. oswa enkonsistan reflete pa blòk la. Yon siyal fliyoresan ki pi fò ak plis konsantre te kolekte nan pwent tib blan an konpare ak tib klè (Figi B anba a).
tib pcr
A: Tandans nan chanje nan siyal la fliyoresan nan tib la transparan ak tib la blan; B: Konparezon entansite fluoresans lan apre li fin ajoute menm kantite fluorescein.
Se konsa, si w ap itilize yon enstriman qPCR ki lekti tèt, eseye tib blan.
3. Kalite (mèg oswa pa mèg)
Enpòtans ki genyen nan bon jan kalite konsomabl yo mete aksan sou isit la. Consommables qPCR yo dwe san kontaminan ak inhibiteurs. Gwo presyon ak radyasyon retire bakteri ak DNases, men se pa pousyè ak rezidi ADN, ki ka anpeche reyaksyon PCR oswa pwodui anplifikasyon ki pa espesifik. Sibstans yo gen absòbe, e menm ti polyan yo pral absòbe fliyoresans nan sistèm reyaksyon an epi afekte koleksyon siyal fliyoresan yo. Yo te itilize yon vèsyon ekzajere nan eksperyans la pou demontre efè kontaminasyon enpurte sou eksperyans la. Jan yo montre nan figi ki anba a, yo te mete yon enpurte nan youn nan twou reyaksyon oktav la. Kòm espere, koub anplifikasyon yo te montre anomali ki make.
Enpurte nan tib reyaksyon PCR
↑ Enpurte nan tib reyaksyon an
8 bann
↑ Repete reyaksyon rezilta pou 8 ti tiyo nou, gòch byen impuretés "devye" koub la.
Rapèl: Fè atansyon pou pa ekspoze consommables yo nan lè a pou yon tan long. Apre w fin retire consommables yo, asire w ke ou sele sak anbalaj la byen vit pou evite manyen li ak men fè. Si sa posib, travay sou yon ban pwòp.
4. Kapasite / Gwosè / Flux
Volim nan detèmine konbyen echantiyon (volim reyaksyon) ka chaje. Surdozaj ka lakòz efikasite transfè chalè redwi, devèsman, oswa kontaminasyon kwa; underdosing ka lakòz pèt echantiyon evaporatif. Blòk chofaj enstriman qPCR la pral detèmine tou consommables aplikab yo ak gwosè sistèm reyaksyon aplikab yo. Debi fasil pou konprann, li se kantite maksimòm echantiyon ki ka chaje nan yon eksperyans sèl. Kapasite komen ak espesifikasyon flux yo montre nan tablo ki anba a:
Yon sèl tib/uit ranje {{0}}.2mL, 0.1mL
{{0}}byen plak 0.2mL, 0.1mL
{{0}}byen plak 0.2mL
Espesifikasyon kapasite yo tou jeneralman divize an estanda ak kalite ki ba, jan yo montre anba a. Ba pwofil consommables gen yon wotè ki pi ba. Konsepsyon kout sa a minimize espas ki anlè sistèm reyaksyon an ("mouri volim" - pati a initil), diminye efè evaporasyon pandan sikilasyon tèmik, epi li pèmèt modil chofaj la vlope li nan yon pi gwo limit pou amelyore efikasite transfè chalè. Se poutèt sa, tib pwofil ba yo konnen tou kòm "vit" tib oswa plak.
tib pcr
Rapèl: Volim reyaksyon souvan itilize a se 20 µL, epi li rekòmande pou itilize yon ti tib reyaksyon volim 0.1 mL oswa yon ti volim.
5. Epesè miray la
Epesè miray tib la afekte dirèkteman konduktiviti tèmik la. Consommables PCR yo ta dwe gen epesè miray inifòm pou bay transfè chalè ki konsistan. Miray la tib ultra-mens se 50 pousan pi mens pase vèsyon estanda a, ki pi lwen diminye baryè a tèmik ak pote pi vit ak pi bon efè repons. Se poutèt sa, yo nan lòd yo maksimize efikasite nan reyaksyon PCR epi asire reyaksyon ki estab ak efikas, inifòm ak ultra-mens PCR consommables yo se chwa ki pi bon.
6. Transparans
Bouchon ak fim sele pou qPCR mande pou gwo klè optik pou asire pi bon pénétration ak transmisyon siyal fliyoresan pandan y ap diminye distòsyon (pou enstriman qPCR tèt-li). Pi wo transparans nan miray tib la, li ka afekte rezilta eksperimantal yo. Rezon ki fè yo te eksplike pi wo a. PCR tradisyonèl ka inyore karakteristik sa a.
7. Jip
Jip yon plak PCR refere a ekstansyon periferik plak la. Lè bati sistèm reyaksyon, jip la aji kòm yon sipò ki estab pou pwosesis pipet epi li bay fòs mekanik ak priz lè yo konbine avèk estasyon travay otomatik yo. Gen twa kalite komen nan jip, mwatye jip ak jip plen (ki koresponn ak A, B, ak C nan figi ki anba a).
Skirtless: Èske yo ka itilize ak pifò enstriman PCR oswa qPCR, men se pa pou aplikasyon otomatik yo. Fasil pou avanse pou pi pandan pipette, pa trè estab, bezwen yo dwe itilize ak yon detantè plak.
Mwatye jip: Ideyal pou aplikasyon otomatik ki gen bon estabilite pipet.
Plak plen jip: Ideyal pou aplikasyon otomatik yo. Bon fòs mekanik, apwopriye pou enstriman PCR ak modil ki vle pèse anvlòp, estabilite segondè pandan pipette.
plak pcr
Konsèy: Siyifikasyon nan jip la se plis fasilite endistriyalizasyon ak otomatik pakèt pwosesis, konbine avèk bra a robotik. Li ka pa bezwen nan laboratwa rechèch tradisyonèl yo, pa gen okenn jip se ase.
plak pcr
8. Parafilm
Se fim nan sele plak PCR te fè nan plastik klè oswa papye aliminyòm. Fim adezif transparan yo pi komen, apwopriye pou 96 oswa 384 plak byen, epi yo ta dwe gen bon transmisyon limyè ase. Lè sele fim nan, yo pral itilize yon ti kat pou peze fim nan alantou twou a sele pou evite flit lè.
Fim aliminyòm adezif ka mwens komen. Malgre ke pa apwopriye pou qPCR, li se konsome ideyal la pou echantiyon limyè-sansib. Paske li ka kout pwen, li fasilite transfè echantiyon nan PCR (pou PCR konvansyonèl).
PCR plak sele fim
Rezime
Kòm konpayi asirans lan nan sistèm PCR, consommables yo trè enpòtan pou amelyore kalite done eksperimantal yo. Mwen espere ke pataje sa a ka ede w konprann kèk konsèy sou PCR consommables epi bay èd pou pi bon seleksyon consommables.