1. Rekiperasyon
●1. Retire kriyovyal la nan nitwojèn likid la, imedyatman mete l nan yon beny dlo 37 degre, epi souke li yon ti kras. Apre likid la fonn (apeprè 1-1.5 minit), retire li epi flite yon ti gout alkòl epi mete l sou ban travay ultra-pwòp la.
●2. Aspire sispansyon selil ki anwo a nan yon tib santrifijeur 15ml plen ak mwayen 10ml (lave tib kriyoprezèvasyon an ak mwayen pou lave tout selil ki respekte miray la), epi santrifuje a 1000 rpm pou 5 minit.
●3. Vide supernatant la epi ajoute 1ml mwayen pou sispann selil yo. Aspire nan yon plat Petri 10cm ki gen 10ml medyòm kilti ak dousman souke retounen ak lide pou fè selil yo nan plat Petri distribye respire.
●4. Mete etikèt sou kalite selil la ak dat, non kiltivatè a, elatriye, epi mete l nan yon enkibatè CO2 pou kiltivasyon. Apre selil yo konfòme yo ak miray la, chanje mwayen an.
●5. Chanje mwayen an chak 3 jou.
2. Pase
●1. Pasaj lè kouvèti selil la nan plat kilti a rive nan 80 pousan -90 pousan.
●2. Aspire mwayen orijinal la.
●3. Ajoute trypsin apwopriye (jis ase pou kouvri selil yo) epi dijere pou 1-2 minit.
●4. Apre selil yo awondi, ajoute yon volim egal nan medyòm ki gen serom pou mete fen nan dijesyon an.
●5. Sèvi ak yon pipèt pou sispann selil yo pa pipette.
●6. Aspire selil yo nan yon tib santrifujeur 15ml epi santrifuje a 1000 rpm pou 5 minit.
●7. Vide supernatant la, ajoute 1-2ml mwayen, epi eksploze selil yo.
●8. Transfere selil yo nan plizyè asyèt depann sou kalite selil la. Anjeneral, gen 5 selil kansè ak 3 selil nòmal. Kontinye kiltive.
3. Kriyokonservasyon Dijere selil yo epi santrifije (ibid.). Sispann selil yo ak solisyon konjelasyon an prepare, epi distribye yo nan kriyovi esterilize, kite yo kanpe pou kèk minit, epi endike kalite selil la ak dat kriyokonservasyon. 4 degre pou 30min, -20 degre pou 30min, -80 degre lannwit lan, epi mete yo nan nitwojèn likid pou depo. Preparasyon solisyon kriyokonservasyon: 70 pousan mwayen konplè plis 20 pousan FBS plis 10 pousan DMSO. DMSO ta dwe tou dousman ajoute gout, souke pandan y ap koule.
