Mwayen kilti selil se baz eleman nitritif pou imite atifisyèlman anviwònman kwasans in vivo selil bèt yo epi kenbe siviv ak pwopagasyon selil yo nan vitro. yon eleman nitritif. Se konsa, ki pwoblèm komen yo rankontre nan itilizasyon mwayen kilti selil? Ann fè yon analiz.
1. Seleksyon sistèm tanpon ak chanjman pH nan mwayen kilti selil
Piske pH pi bon pou pifò selil yo se ant 7.0 ak 7.4, devyasyon nan seri sa a ka gen efè danjere sou kwasans selil yo. Sepandan, kondisyon pH divès selil yo pa egzakteman menm. Selil primè kiltive yo jeneralman gen pòv tolerans nan fluctuations pH, pandan y ap liy selil enfini yo gen tolerans fò. Se poutèt sa, nan kilti prensipal la, sistèm tanpon nan mwayen kilti a pi enpòtan. Mwayen kilti selil jeneral la sèvi ak yon sistèm sèl balanse, men diferan medya kilti oswa menm seri medya kilti sèvi ak diferan sistèm balanse sèl. Pou egzanp, seri 199 ak seri MEM tout gen mwayen kilti sistèm Hanks ak kilti sistèm Earle. baz. Gen kèk medya yo pa mansyone pi wo a konvansyonèl sistèm balanse sèl, tankou mwayen RPMI1640, mwayen F12. Sistèm sèl balanse nan MEM ba serom mwayen an tou se pa yon sistèm sèl konvansyonèl balanse, ak kapasite nan tanpon nan sistèm nan sèl balanse se pi fò pase sa yo ki nan sistèm nan sèl konvansyonèl balanse.
kilti selil
Gen anpil rezon pou gout pH pandan kilti selil. Lè selil yo ap grandi trè vit, valè pH anjeneral desann rapidman, ki ka rezoud pa alè pasaj, ogmante rapò pasaj la, oswa diminye volim nan serom. Anplis de sa, twò sere bouchon boutèy kilti a, kapasite tanpon ensifizan nan sistèm tanpon NaHCO3, konsantrasyon sèl kòrèk nan mwayen kilti a, bakteri, ledven oswa kontaminasyon chanpiyon ka lakòz tou pH la tonbe souvan rapidman. Nan moman sa a, ou ka rezoud li nan fason sa yo:
1) Ogmante konsantrasyon NaHCO3 nan mwayen kilti a oswa diminye konsantrasyon CO2 nan enkibatè a. Lè kontni an NaHCO3 se ant 2.0 g/L ak 3.7 g/L, konsantrasyon CO2 ki koresponn lan se 5 ~ 10 pousan;
2) Chanje nan yon mwayen kilti endepandan CO2-;
3) Byen dekole bouchon boutèy la. Ajoute tanpon HEPES nan mwayen kilti a pou fè konsantrasyon final 10-25 mM;
4) Sèvi ak solisyon kilti ki baze sou sèl Earle nan anviwònman kilti CO2, epi sèvi ak solisyon kilti ki prepare pa sèl Hanks nan anviwònman kilti atmosferik la;
5) Jete kilti oswa esterilize ak antibyotik si kontaminasyon se kòz la.
2. Plizyè aditif enpòtan yo souvan itilize nan medya kilti selilè ak pwoblèm ki ta dwe peye atansyon a nan pwosesis itilizasyon an.
Fenol wouj yo itilize kòm yon endikatè nan pH nan medya kilti selil yo. An jeneral, valè pH mwayen an ka jije pa efè endikatè fenol wouj, men kontni an nan fenol wouj nan serom ki ba oswa mwayen kilti selil san serom se diferan de sa ki nan mwayen kilti selil òdinè, epi yo pa ka obsève. pa je toutouni oswa Valè pH la detèmine anpirik, epi li rekòmande pou itilize yon mèt pH pou mezire. Fenol wouj anjeneral pa gen yon efè enpòtan sou bon jan kalite a nan pwodwi byolojik ki pwodui nan medya kilti selil serom ki gen ladan, epi li ka retire tou pa teknik pou pirifye, men wouj fenol ka lakòz dezekilib intraselilè sodyòm / potasyòm nan medya kilti selil san serom. , ki afekte kwasans selil yo.
plak kilti selil
Bikabonat sodyòm se sitou itilize kòm yon sistèm tanpon nan mwayen kilti selil, epi tou li gen efè a nan reglemante presyon osmotik. Anjeneral kantite lajan an rekòmande nan bikabonat sodyòm nan enstriksyon yo pwodwi pou itilize se yon kantite estanda ak san danje, ki se jwenn ki baze sou eksperyans pratik sou yon baz syantifik. Sepandan, akòz liy selil diferan (tanch), selil la menm ka adapte yo ak diferan anviwònman (diferan tolerans selilè, elatriye), e gen diferans rejyonal nan bon jan kalite dlo, elatriye, ki kapab tou yon ti kras modifye nan pwodiksyon aktyèl la. pwosesis, men itilize nan Moun ki bezwen fè tès yo korespondan (fizikochimik ak tès pwodiksyon selil, elatriye).
HEPES se yon tanpon ki pa iyonik ak bon kapasite tanpon nan ranje pH 7.2 a 7.4, epi li ka toksik nan kèk selil nan konsantrasyon segondè. Tanpon HEPES ka itilize ak nivo ki ba nan kabonat sodyòm (0.34g/L) pou konpanse ogmantasyon nan presyon osmotik ki te koze pa adisyon HEPES adisyonèl. Ranje konsantrasyon san danje li se 10 ~ 25mmol / L.
Piruvat sodyòm ka itilize kòm yon sous kabòn altènatif nan kilti selil, epi byenke selil yo prefere glikoz kòm yon sous kabòn, selil yo ka metabolize piruvat sodyòm tou nan absans glikoz.
Glutamin trè enstab nan solisyon. Li ka dekonpoze a 50 pousan nan 4 degre pou 1 semèn. Li pi bon pou prepare li separeman lè w ap itilize a, estoke li nan yon frijidè -20 degre, epi ajoute li nan mwayen kilti selil la anvan w itilize.
